液相色譜柱是液相色譜分析系統(tǒng)的核心部件,通過固定相與流動(dòng)相間的相互作用實(shí)現(xiàn)樣品組分分離。該裝置由柱管、壓帽、篩板等部件構(gòu)成,其核心分離機(jī)制基于樣品中各組分在固定相(色譜柱填料)和流動(dòng)相(液體溶劑)間分配系數(shù)的差異。當(dāng)流動(dòng)相推動(dòng)樣品通過色譜柱時(shí),不同組分因極性、分子大小等性質(zhì)差異,與固定相產(chǎn)生吸附、分配或離子交換等作用力的強(qiáng)弱不同,導(dǎo)致分配系數(shù)大的組分在固定相中停留時(shí)間更長(zhǎng)、流出更慢,而分配系數(shù)小的組分則更快流出,最終實(shí)現(xiàn)按保留時(shí)間順序分離。
根據(jù)分離機(jī)理,液相色譜柱可分為多種類型:反相色譜柱采用非極性固定相與極性流動(dòng)相,適用于極性較弱物質(zhì)的分離;正相色譜柱則相反,以極性固定相與非極性流動(dòng)相匹配,常用于極性化合物分析。離子交換色譜柱通過離子交換作用分離帶電粒子,親水作用色譜柱專門針對(duì)極性和親水性化合物設(shè)計(jì),而尺寸排阻色譜柱則依據(jù)分子體積差異實(shí)現(xiàn)分離。
液相色譜柱在維護(hù)與保存的注意事項(xiàng):
1、沖洗保養(yǎng)
反相柱:用完後用甲醇-水(50:50)或純甲醇沖洗,去除緩沖鹽和殘留樣品。
正相柱:用正己烷或氯仿沖洗,避免水分殘留。
離子交換柱:用高濃度鹽溶液或低pH酸/堿溶液再生填料。
2、存儲(chǔ)條件
反相柱:保存于甲醇-水(如50:50)中,防止填料干燥裂解。
正相柱:密封保存于正己烷等非極性溶劑中,避免吸濕。
所有柱型:長(zhǎng)期不用需加封柱接頭,避免污染或溶劑揮發(fā)。
3、禁止操作
切勿用酸性或堿性流動(dòng)相沖洗硅膠基質(zhì)柱(如C18柱用pH>9的溶液)。
避免使用氧化性溶劑(如濃硫酸、高濃度過氧化氫)清洗柱子。